Diagnóstico de la leishmaniasis: de la observación microscópica del parásito a la detección del ADN / Leishmaniasis diagnosis: going from microscopic observation of parasite to DNA detection

Introducción: la leishmaniasis es una enfermedad causada por varias especies del género Leishmania, de la cual se han incrementado los reportes en los últimos años. Diversos factores genéticos, inmunológicos y asociados al parásito determinan el establecimiento de la infección y la ocurrencia de enfermedad, que se presenta en formas clínicas muy diversas, lo cual condiciona, entre otros elementos, el método diagnóstico que se aplica. Métodos: se hizo una revisión de la literatura básica y actualizada sobre aspectos generales de la leishmaniasis: la enfermedad y su situación epidemiológica, el ciclo de vida y la transmisión, vectores, presentaciones clínicas y diagnóstico; este último acápite contiene información sobre los principales métodos que se utilizan en el presente. Se puntualizó en la forma en que se apoya el diagnóstico desde el grupo de Leishmania del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí", que constituye el centro nacional de referencia para esta enfermedad tropical. Resultados: se muestra información actualizada sobre los temas escogidos, con un enfoque orientador y práctico, dirigido al personal de salud que debe enfrentar casos con sospecha de leishmaniasis. Se muestran tablas y gráficos que resumen de manera organizada aspectos relevantes, así como el algoritmo de trabajo que se sigue en el instituto con relación al diagnóstico de esta enfermedad, con énfasis especial en las aplicaciones al diagnóstico molecular que ha realizado el grupo de trabajo. Conclusiones: debido a que la leishmaniasis permanece aún sin control, el diagnóstico oportuno continúa siendo una necesidad. Todos los métodos aportan información de utilidad para la toma de decisiones en el tratamiento clínico, la imposición del tratamiento y el enfoque epidemiológico de esta parasitosis. Entre ellos, proponemos un algoritmo de trabajo en nuestro laboratorio, con el empleo de los métodos que resultan más útiles de acuerdo a nuestras condiciones y experiencias.

Introduction: leishmaniasis is a disease caused by several species from Leishmania genus, which has been increasingly reported in the last few years. Several genetic, immunological factors and others related to this parasite have been associated to the outcome of the infection, and the occurrence of illness in varied clinical forms. All the aforementioned has an impact on the diagnostic method that should be used. Methods: a basic and recent literature review was made, mainly focused on general aspects of leishmaniasis as epidemiological situation of disease, life cycle and transmission, vectors, clinical presentation and diagnosis; the latter shows information about the main methods used at present. The procedure followed by the Leishmania group at "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine to support the diagnostic activities was presented as well. Results: updated practical information about the chosen topics was presented, with a practical guiding approach aimed at the health personnel that must face suspected leishmaniasis cases. Tables and figures summarized relevant aspects in an organized form, as well as the working algorithm of Institute concerning diagnosis was presented. The application of molecular diagnosis by this working team was particularly underlined. Conclusions: as leishmaniasis is still out of control, opportune diagnosis remains a must. All the methods provide useful information for taking decisions on clinical management, treatment and epidemiology of this parasitosis; hence, a working algorithm was submitted in our lab based on the most useful methods under our present conditions and experience.

Toxoplasma gondii antigenuria in patients with acquired immune deficiency syndrome

A longitudinal study was performed with sera and urine of patients with acquired immune deficiency syndrome (AIDS), taken before, during and after clinically Toxoplasma infection. The tested patients were followed for an average of two years. The titres of the specific IgG and IgM antibodies were measured by an indirect fluorescent antibody test (IFAT), and the appearance of circulating antigens of T. gondii was determined in 36 urine samples of 13 patients with neurotoxoplasmosis by means of the coagglutination test. The presence of T. gondii antigens in the urine of AIDS patients by this test was correlated with the immunoblot technique, with clinical symptoms and also with pathological findings. Our results indicate that the detection of T. gondii antigens in the urine of AIDS patients can be regarded as a rapid and efficient method for the diagnosis of acute toxoplasmosis.

Toxoplasma gondii: caracterización de un anticuerpo monoclonal anti-P30

Se caracterizó un anticuerpo monoclonal específico a Toxoplasma gondii. El hibridoma produjo inmunoglobulinas IgG. El análisis por Western Blot demostró que el anticuerpo monoclonal fue específico para el antígeno de masa molecular aparente de 30 kd, presente en la superficie del parásito. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir de fluido ascítico de ratón y se acopló a Sefarosa 4B. Este inmunoabsorbente fue utilizado con el fin de purificar el antígeno parasitario específico. El anticuerpo monoclonal estudiado puede ser de utilidad para las técnicas que contribuyan con el diagnóstico de la toxoplasmosis.

A specific monoclonal antibody was characterized to Toxoplasma gondii. The hybridoma produced IgG immunoglobulins. The Western Blot analysis showed that the monoclonal antibody was specific for the antigen of an apparent mollecular mass of 30 kd, which was present on the antigen surface. The monoclonal antibody was purified starting from mouse´s ascitic fluid and it was matched with Sepharose 4B. This immunoabsorbent was used to purify the specific parasitary antigen. The monoclonal antibody studied may be useful for those tecniques contributing to the toxoplasmosis diagnosis.

Usefulness of the detection of Toxoplasma gondii of antigens in AIDS patients

La Encefalitis Toxoplasmica (ET) es la mas importante complicacion infecciosa del Sistema Nirvioso Central en pacientes de SIDA. Anticuerpos ant-Toxoplasma gondiin fueron detectados en 57 de 79 pacientes de SIDA (71 por cento). De estos seropositivos, desarrollaron la enfermedad (ET) 14 (25 por cento), en los que coincidentemente se detecto la presencia de antigeno del parasito en orina y por tanto fueron objeto de una terapia efectiva, con la subsecuente desaparicion de los sintomas y de los antigenos excretados. Por los resultados del presente trabajo, consideramos lo util de monitorear en estos pacientes la presencia de antigenos de T. gondii con el objetivo de aplicar oportunamente metodos quimoprofilacticos que eviten el surgimiento de manisfestaciones neurologicas en estos pacientes.